Estudio de Inhibición de la Fenoloxidasa de la papa

 Objetivos:

a.    Determinar la actividad enzimática de la fenoloxidasa presente  en extractos de papa.

b.    Calcular la Km de la enzima de los datos de actividad enzimática, frente a diferentes concentraciones de sustrato.

c.    Estudiar el tipo de inhibición que ejerce el ácido benzoico sobre la actividad de la fenoloxidasa de la papa.

Marco Teórico:

Las enzimas son catalizadores muy potentes y eficaces, químicamente son proteínas.  Como catalizadores, las enzimas actúan en pequeña cantidad y se recuperan indefinidamente.  No llevan a cabo reacciones que sean energéticamente desfavorables, no modifican el sentido de los equilibrios químicos, sino que aceleran su consecución.

La característica más sobresaliente de las enzimas es su elevada especificidad.  Esta es doble y explica que no se formen subproductos:

(1) Especificidad de sustrato.  El sustrato (S) es la molécula sobre la que el enzima ejerce su acción catalítica.

(2) Especificidad de acción.  Cada reacción está catalizada por un enzima específico.

La acción enzimática se caracteriza por la formación de un complejo que representa el estado de transición.

Los estudios de inhibición enzimática clásica reversible implican el análisis gráfico de los recíprocos de las velocidades iniciales 1/V_o y de las concentraciones de sustrato 1/ [S]

Materiales y Reactivos.

Baño termométrico

tubos de ensayo,

gradilla,

bureta de 50 mL,

goteros,

 pipetas de 5 y 10 mL,

 erlenmeyers de 125 mL,

gaza,

embudo buchner,

 licuadora,

espectrofotómetro visible.

Reactivos	Toxicidad
Pirogalol (1,2,3 trihidroxibenceno) 1 % (solución madre)	vértigo, dolor de cabeza, dificultad respiratoria, náusea, jadeo, dolor de garganta.
amortiguador, citrato 0.1 M de pH 6	Los citratos son las sales del ácido cítrico, y son buenos reguladores de acidez. A continuación se incluye una lista de los principales Forma ionizada del ácido cítrico. Citrato de aluminio. Citrato de calcio o Sal amarga, utilizada en la preservación y condimentación de alimentos. Citrato de potasio, utilizado como solución buffer para regular el pH. Citrato de sildenafil, es el nombre del producto Viagra®, entre otros. Citrato de sodio, utilizado como solución buffer para regular el pH, y para evitar la coagulación de la sangre. Citrato de cobre
NaF 1%	El fluoruro de sodio de fórmula NaF, es un compuesto químico inorgánico, de características sólido, generalmente se presenta como un polvo cristalino, blancuzco descolorido y es la principal fuente de fluoruro ion. Su punto de fusión está en 992 °K y su peso específico es de 2,9 (agua=1) Posee una presión de vapor de 1,33 hPa. Su solubilidad en agua es de 42 g/L (20 °C / 68 °F).
Acido benzoico 0.02 %	En personas sensibles se pueden producir reacciones alérgicas. En combinación con ácido ascórbico (E300), se puede formar benceno, un hidrocarburo altamente cancerígeno. También la presencia de E220 (dióxido de azufre y sus derivados), colorantes artificiales diazoicos, ácido salicílico, etc.,pueden aumentar los riesgos.
Sulfato de amonio	Causa Inflamación, irritación, enrojecimiento y dolor Ardor de garganta, dolor estomacal nausea.  Causa irritación en las vías gastroinstentinales, Causa vómito y diarrea. Ardor de garganta, tos, deficiencia respiratoria. Causa irritación en las vías respiratorias
Papa congelada.

Diseño experimental: